Валидация новых отечественных тест-систем для иммуноферментной диагностики вирусов картофеля

Исследования проводили с целью подтверждения соответствия критериям пригодности новых российских иммуноферментных тест-систем для определения вирусов при анализе семенного картофеля. Работу выполняли в лабораторных условиях в 2025 г. Соответствие критериям валидации определяли в шести аналитических сериях по каждой тест-системе в условиях повторяемости и переменных данных. Образцами для испытаний служили безвирусные растения картофеля сортов Мираж и Дезире, а также инфицированные растения из коллекции вирусных патогенов: на М-вирус картофеля (МВК) – образцы М-24 и М-56, на Y-вирус картофеля (YВК) – сорт Гусар и инфицированные листья табака сорта Самсун, на вирус скручивания листьев картофеля (ВСЛК) – сорт Оса. По каждой аналитической серии испытаний были получены массивы данных из 48 идентичных результатов, по которым высчитывали средние арифметические значения (Хср.), дисперсии (σ2), стандартные (средние) квадратические отклонения (σ), необходимые для оценки критериев валидации. Новые российские иммуноферментные тест-системы пригодны для достоверного определения М-, Y-вирусов и вируса скручивания листьев картофеля, поскольку по всем валидационным параметрам соответствуют критериям приемлемости, предъявляемым стандартами по валидации биоаналитических методов: повторяемость единичных анализов при тестировании безвирусных и инфицированных растений составляла соответственно 0,15…0,43 и 2,60…4,96 %, внутрилабораторная прецизионность – 0,18…0,34 и 4,56…11,60 %, коэффициенты вариации в условиях повторяемости – 2,5…16,0 %, в условиях прецизионности – 4,8…17,0 %. Величина значений оптической плотности с учетом доверительного интервала неопределенности при анализе инфицированных растений была в 7,8…16,0 раз выше, чем при тестировании безвирусных растений, что значительно перекрывает рекомендуемое трехкратное превышение отрицательного контроля. При оценке критерия воспроизводимости получено 100 %-ное совпадение как положительных, так и отрицательных результатов.

1. Совершенствование отечественных тест-систем для иммуноферментной диагностики вирусов картофеля / А. И. Усков, Ю. А. Варицев, П. А. Галушка и др. // Достижения науки и техники АПК. 2024. Т. 38. № 9. С. 18–22. doi: 10.53859/02352451_2024_38_9_25.

2. Q2 (R2) validation of analytical procedures. Guidance for industry. ICH, 2024. 36 p.

3. Диагностика вирусов картофеля методом иммуноферментного анализа (ИФА) с использованием диагностических наборов производства ФГБНУ «ФИЦ картофеля имени А. Г. Лорха» (методические указания) / А. И. Усков, С. В. Жевора, Ю. А. Варицев и др. М.: ФИЦ картофеля имени А. Г. Лорха, 2022. 23 с.

4. Rational of 3,3’,5,5’-tetramethylbenzidine as the chromogenic substrate in colorimetric analysis / X. Zhang, Q. Yang, Y. Lang, et al. // Analytical Chemistry. 2020. Vol. 92. No. 18. P. 12400–12406. doi: 10.1021/acs.analchem.0c02149.

5. Межгосударственный стандарт ГОСТ 34100.3-2017/ISO/IEEC Guide 98-3:2008 Неопределенность измерения. Часть 3. Руководство по выражению неопределенности измерения. М.: Стандартинформ, 2018. 112 с.

6. Валидация тест-системы для серодиагностики африканской чумы свиней методом иммуноблотинга / О. А. Дубровская, А. Д. Середа, А. С. Кзакова и др. // Сельскохозяйственная биология, 2018. Т. 53. № 2. С. 430–437. doi: 10.15389/agrobiology.2018.2.430rus.

7. Писарев В. В., Уляшова М. М., Гильдеева Г. Н. Валидация иммуноферментной тест-системы для доклинических исследований фармакокинетики ритуксимаба // Ведомости научного Центра экспертизы средств медицинского применения. 2019. Т. 9. № 2. С. 131–139. doi: 10.30895/1991-2919-2019-9-2-131-139.